1 斜面低温保藏法

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至 2—8℃的冰箱中保藏。

保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存 2—4 个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌每月移种一次。

2 液体石蜡保藏法

1. 将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌 30 分钟，然后放在 40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。
2. 将需要保藏的菌种，在zui适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。
3. 用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端 1cm 为准，使菌种与空气隔绝。
4. 将试管直立，置低温或室温下保存(有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长)。

3 滤纸保藏法

1. 将滤纸剪成 0.5×1.2cm 的小条，装入 0.6×8cm 的安瓿管中，每管 1—2 张，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌 30 分钟。
2. 将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
3. 取灭菌脱脂牛乳 1—2ml 滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。
4. 用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
5. 将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
6. 将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13 熔封，保存于低温下。
7. 需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。

4 沙土保藏法

1. 取河沙加入 10%稀盐酸，加热煮沸 30 分钟，以去除其中的有机质。
2. 倒去酸水，用自来水冲洗至中性。
3. 烘干，用 40 目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
4. 另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
5. 烘干，碾碎，通过 100 目筛子过筛，以去除粗颗粒。
6. 按一份黄土、三份沙的比例(或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土)掺合均匀，装入 10×100mm 的小试管或安瓿管中，每管装 1g 左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。
7. 抽样进行无菌检查，每 10 支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养 48 小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
8. 选择培养成熟的(一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好)优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。
9. 于每支沙土管中加入约 0.5ml(一般以刚刚使沙土润湿为宜)孢子悬液，以接种针拌匀。
10. 放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在 12 小时内抽干。
11. 每 10 支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
12. 若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。
13. 需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。

5 液氮冷冻保藏法

1. 准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用 75×10mm 的，或能容 1.2mm 液体的。
2. 加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌 15 分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如 10%的甘油蒸馏水溶液或 10%二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌 15 分钟。
3. 接入菌种将菌种用 10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。
4. 冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降 1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
5. 保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。
6. 恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。

​6 冷冻干燥保藏法

1. 准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管(图Ⅶ-15)，大小要求外径 6—7.5mm，长 105mm，球部直径 9—11mm，壁厚 0.6—1.2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌 30 分钟，备用。
2. 准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在zui适培养基中用zui适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求 24—48 小时的培养物;酵母需培养 3 天;形成孢子的微生物则宜保存孢子;放线菌与丝状真菌则培养 7—10 天。
3. 制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳 2ml 左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装 0.2ml。
4. 冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰(固体 CO2>)酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻 4—5 分钟，即可使悬液结冰。
5. 真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。装置仪器如图Ⅶ-16，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。抽气一般若在 30 分钟内能达到 93.3Pa(0.7mmHg)真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度 26.7Pa(0.2mmHg)，保持压力6—8 小时即可。封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用 L 形五通管(图Ⅶ-17)继续抽气，约 10 分钟即可达到 26.7Pa(0.2mmHg)。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。