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实验室新手指南之DNA&RNA提取
  • 发布日期:2017-12-22      浏览次数:1013
    •  DNA 提取

      1. 取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入 1.5 ml Eppendorf 管中;
      2. 加入 800 μl 的 CTAB 提取缓冲液,混匀(CTAB 在 65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;
      3. 小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯fang(各 400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心 10 min;
      4. 小心吸取上清液,加入等体积的氯fang,混匀,4℃,12000 r/min,离心 10 min;
      5. 重复步骤(4)1-2 次,以蛋白层不出现为止;
      6. 取上清,-20℃沉淀 1h,4℃,12000 r/min,离心 10 min;
      7. 弃去上清液,用 70%乙醇洗涤沉淀 2 次;
      8. 室温下干燥后(一般干燥 5-15 min),溶于 30-50 μl DEPC 去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用。

      RNA 提取

      样品处理:

      1. 培养细胞:收获细胞 1-5×107,移入 1.5ml 离心管中,加入 1ml Trizol,混匀,室温静置 5min。
      2. 组织:取 50-100mg 组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可)置 1.5ml 离心管中,加入 1ml Trizol 充分匀浆,室温静置5min。

      提取步骤:

      1. 加入 0.2ml 氯fang,振荡 15s,静置 2min。
      2. 4℃离心,12000g×15min,取上清。
      3. 加入 0.5ml 异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置 10min。
      4. 4℃离心,12000g×10min,弃上清。
      5. 加入 1ml 75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。4℃,7500g×5min,弃上清。
      6. 晾干,加入适量的 DEPC H2O 溶解(65℃促溶 10-15min)。
    魏经理
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