灭菌方法概述

热灭菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min 或 180℃45~60min。

蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用 68kPa(115℃)高压灭菌 10min; 布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121.3℃)高压灭菌15~20min。

滤过除菌：适于含有不耐热成分的培养基和试剂的除菌，用孔径为 0.22μm 微孔滤膜可除去细菌和霉菌等，用此滤膜过滤两次，可使支原体达到某种程度的去除，但不能除去病毒。

紫外线：紫外线的波长为 200~300nm，zui强是在 254 nm，6~15 平方米zui少一只紫外灯，高度要在 2.5m 以下，湿度 45%~60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌zui差，实验前应不低于 30 分钟的照射时间。

熏蒸消毒：当遇有细胞培养出现多次污染，或实验室两个月一次的常规消毒，均可用高锰酸钾 5~7.5g，加甲醛(40%)10~15ml，混合放入一开放容器内，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24小时，致少 4 小时以上。

煮沸消毒：紧急情况时使用，金属器械和胶蹇在水中煮 20~30 分钟，趁热倾去水分即可使用。

化学消毒：化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制进行消毒灭菌的方法。实验室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。常用的有：2%煤酚皂溶液(来苏尔)、0.25%新洁尔灭、1%升gong、3~5%甲醛溶液、75%酒精。

沸消毒法：

注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约

15～30min，对于芽孢则需煮沸约 1～2h。

高压蒸汽灭菌法：

高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中zui常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到 1.05kg/cm2 时，水蒸气的温度升高到 121℃，经 15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

干热灭菌法

通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把

待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至 160～170℃ 维持 1～2h。

干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。

灭菌前的准备：

玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。

干燥箱灭菌

将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至 160～170℃并恒温 1～2h，注意勿使温度过高，超过 170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为 120℃持续 30 分钟即可。温度降至 60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。

用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。

火焰灭菌

直接用火焰灼烧灭菌，迅速*。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。

培养皿的灭菌

培养皿的灭菌一般有干热灭菌和高压蒸汽灭菌两种方法。灭菌的具体过程是先将需要灭菌的培养皿用报纸包起来，置于干燥箱内加热到 160°C 灭菌 90-120 分钟(干热灭菌)，或在 121°C 高压灭菌 20-30 分钟(高压蒸汽灭菌)，然后放到烘箱中干燥，去除蒸汽凝结的水。塑料制的培养皿一般都是一次性的，但也有一些塑料培养皿是可以重复使用的。

枪头的灭菌

将放入枪头盒中湿热灭菌。121 度，15-20 分。为了避免水蒸

气困扰，可以在枪头盒外包上报纸，或者灭菌后置于温箱中干燥。